Praktikum z biochemie

Sylabus

Examples of experiments: 1) Determination of glycogen concentration in rat liver after starvation: the experimental aim is to isolate and determine glycogen content in rat liver. The glycogen content in the livers of two individuals, normally fed rats and short-term fasted rats, will be compared.

Glycogen will be separated from mono- and oligosaccharides and hydrolyzed in acidic conditions. The resulting glucose will be determined spectrophotometrically using an enzymatic test. 2) Isolation of recombinant protein, SDS-PAGE electrophoresis: the experimental aim is to isolate GST-fusion protein (14-3-3 or beta-galactosidase) from a bacterial culture of Escherichia coli.

Recombinant GST-fusion protein will be isolated from bacterial culture of E. coli by affinity chromatography. The quality of the individual purification steps will be verified by SDS-PAGE electrophoresis. 3) Phospholipids in biological membranes: the experimental aim is to compare the quantitatively different content of phospholipids in the membranes of erythrocytes of ruminant and non-ruminant animals.

Phospholipids will be divided into basic groups by thin layer chromatography and the relative proportion of selected phospholipid species will be determined quantitatively by densitometric image analysis.

Anotace

Praktikum z biochemie je určeno studentům biologických bakalářských programů, kteří absolvovali přednášku Biochemie (MB150P04) nebo Základy biochemie (MB150P40). Praktikum slouží výuce základních návyků práce v biologické laboratoři. Úlohy jsou koncipovány s ohledem na to, že jde o praktikum pro biology a že s biochemickými metodami se může ve své práci setkat každý biolog. Úlohy proto nejsou náročné, je však kladen důraz na práci vlastníma rukama. Praktikum probíhá 1 týden, studenti pracují ve skupinách po dvou.

Cílem praktika je ukázat jakými metodami lze studovat vlastnosti některých biologicky významných sloučenin (lipidů, sacharidů, proteinů a enzymů v biologických materiálech). Studenti se učí základním dovednostem práce v laboratoři a sami se naučí používat důležité biochemické metody jako chromatografii, spektrofotometrii či elektroforézu proteinů. Studenti se učí zvládnout biologický experiment - od začátku jeho plánování až k jeho vyhodnocení a formulaci závěrů v protokolu. Podmínkou úspěšného zvládnutí experimentů je, aby se posluchači před vstupem do praktika seznámili s teoretickým základem každé úlohy.

Další informace o Praktiku a zápis do jednotlivých turnusů jsou na serveru Moodle (http://dl2.cuni.cz/).