Syllabus
1. Úvod do buněčné a molekulární endokrinologie - Hypotalamo- hypofyzárního systému obratlovců. Přehled hypofyzárních buněk a jejich hormonů. Ontogeneze hypofýzy a specializace buněk. Krevní oběh v hypofýze. 2. Melatonin a melatoninové receptory - Cirkadiální a anuální rytmus. Melatonin a jeho syntéza v epifýze. Hlavní signalizační dráhy melatoninových receptorů MT1, MT2 a MT3. Fotoperioda a role melatoninu. 3. GnRH neurony a kisspeptin - Centrální mechanismy zabezpečující reprodukční funkcíe. Gonadotropiny uvolňující hormon (GnRH) a GnRH neurony . Kisspeptin a kisspeptinové neurony. Menstruační cyklus. Zpětnovazebná regulace testosteronem a estrogeny 4. Mechanismy sekrece hormonů a neuropřenašečů - Sekrece hypofyzárních hormonů a neuropřenašečů. Exocytosa. Iontové kanály v hypofýze Integrace receptorových a kanálových funkcí. Autokrinní a parakrinní signalizace. GABA, ATP a další parakrinní přenašeče v hypofýze. 5. Hormony adenohypofýzy - Receptorové funkce (PLC, AC, PKA,PKC), GnRH a GnRHII receptor. TRH, CRH, STR, GhRH. Luteinizační a folikuly stimulační hormon (LH a FSH). Prolaktin. Růstový hormone (GH). Hormony štítné žlázy (T3 a T4). Kortisol. 6. Hormony neurohypofýzy - Hormony neurohypofýzy. Oxytocin a vasopresin a jejich receptory. Supraoptická, paraventrikulární a suprachiasmatická jádra. Glie a neurony v neuroendokrinním hypotalamu. Kontrola behaviorálních funkcí oxytocinem a vasopresinem 7. Hypotalamo-pituitárně-adrenální osa (HPA) - Funkce hypotalamo-pituitárně-adrenální osy (HPA). Stres a regulace HPA osy. CRH hormon, CRH receptor. Glukokortikoidy a jejich účinky. Význam CRH a glukokortikoidů v CNS. 8. Intracelulární Ca2+ signalizace v endokrinních buňkách - Mechan ismy intracelulární Ca2+ signalizace, Ca2+ homeostáza . Vstup extracelulárního Ca2+ do buňky .Mobilizace Ca2+ z intracelulárních zdrojů. Odstraňování Ca2+ z cytoplazmy. Metody měření intracelulární koncentrace Ca2+ (Fura, elektrofyziologické monitorování). Single cell RT PCR. 9. Purinergní signalizace - Extracelulární ATP. Klasifikace purinergní ch P1 a P2 receptorů. P2X a P2Y DNA konstrukty. Transfekce buněk a elektrofyziologické měření. Purinergní signalizace v hypotalamu a hypofýze
Obsah praktické části
· Teorie kultivace buněk, organotypických kultur a mozkových řezů
· Pěstování lidské linie HEK293 buněk
· Izolace a kultivace hypofyzárních buněk
· Transfekce HEK293 buněk
· Praktická cvičení a ukázky v molekulární biologii, základy molekulárně biologických postupů - návrh specifických primerů, analýza výsledků sekvenace, vektory
· Měření změn [Ca2+] v cytoplazmě gonádotropních buněk mikrofluorimetrickou metodou
· Metody purifikace hormonů pro klinické použití
· Stanovení LH hormonu RIA metodou
· Elektrofyziologické měření proudů vyvolaných stimulací ligandem aktivovaných iontových kanálů v transfekovaných HEK293 buňkách
· Elektrofyziologické měřen sekrece GABA a glutamátu v akutních hypotalamických řezech
Annotation
Please note, the course is in Czech language only.
This course consists of lectures and practical training dealing with endocrine functions and it is recommended for master students focused on animal physiology, neurobiology, cell and molecular biology, biochemistry, and others intersted in biomedical sciences.