Mikroinjekční a mikromanipulační praktikum

Sylabus

Úloha1: RNA interference embryonálně letálního genu u C. elegans  

- seznámení s morfologií C. elegans, princip RNA interference

- in vitro syntéza dsRNA

- příprava nástrojů pro mikroinjekci (kapiláry, podložky pro imobilizaci C. elgens

- seznámení s mikromanipulátorem, vlastní mikroinjekce  

Úloha2: Studium migračního potenciálu kmenových buněk  

- problematika kmenových buněk

- seznámení se s modelovým organizmem Xenopus tropicalis

- příprava RFP pozitivních Sertoliho kmenových buněk odvozených z varlat X. tropicalis a pěstovaných v buněčné kultuře pro mikroinjekční experiment

- analýza buněk před mikroinjekcí pomocí cell counteru

- příprava médií, kapilár a nástrojů pro mikroinjekci

- mikroinjekce Sertoliho kmenových buněk do pulců X. tropicalis

- light sheet mikroskopie - pozorování a záznam migračních tras mikroinjikovaných buněk

- příprava fotodokumentace.

Předmět je vyučován za podpory projektu Zvýšení kvality vzdělávání na UK a jeho relevance pro potřeby trhu práce, reg.č. CZ.02.2.69/0.0/0.0/16_015/0002362.

Anotace

Cílem praktik je seznámit studenty s mikroinjekčními a mikromanipulačními technikami na modelu háďátka (C. elegans) a drápatky (X. laevis a X. tropicalis). V kurzu bude taktéž využita light sheet a live cell imaging mikroskopie.