Experimentální sání na modelu Trypanosoma culicavium – Culex p. quinquefasciatus
-příprava kultury, počítání v komůrce, ředění kultury
-deaktivace krve v teplé lázni, příprava krmítka s membránou
-sání
-pitva dříve nasátých komárů
-fixace a barvení pozitivních preparátů
V roce 2020 bude zavedena další úloha týkající se helmintologie.
","inLanguage":"cs"},{"@type":"Syllabus","text":"\r\nStaining methods, manipulation with laboratory mouse
\r\n\r\n
- blood smear, thick drop
\r\n- staining of dry smears by Giemsy-Romanowski method
\r\n- fast staining by Dade Diff-Quik
\r\n- manipulation with laboratory mouse, infection with Trypanosoma brucei, Plasmodium berghei
\r\n\r\n
Fluorescent staining methods
\r\n\r\n
- vital staining with acridine orange
\r\n- nuclear staining by Hoechst or DAPI
\r\n- pH sensitive fluorescent probes
\r\n- FITC labeling
\r\n- immunofluorescence on wet mounts
\r\n\r\n
Basic cultivation techniques
\r\n\r\n
- preparation of antibiotic stock solutions
\r\n- isolation of the Tritrichomonas foetus axenic culture using a migration tube
\r\n- passage of axenic cultures, sterility test
\r\n- freezing techniques, cryopreservation of protozoa
\r\n\r\n
Cloning
\r\n\r\n
- Isolation of clones by dilution method (Tetrahymena pyriformis)
\r\n- isolation of clones by limiting dilution method (Trichomonas vaginalis)
\r\n- isolation of clones on agar plates (Crithidia fasciculata)
\r\n\r\n
Quantitative work with protists
\r\n\r\n
- Work with Burker's counting chamber
\r\n- calculation of cell concentration
\r\n- evaluation of the growth experiment, calculation of doubling time from growth curves
\r\n\r\n
ELISA
\r\n\r\n
- use in diagnostics
\r\n- test for the presence of antibodies against Toxoplasma gondii
\r\n\r\n
PCR
\r\n\r\n
- use in diagnostics
\r\n- PCR test for human pathogens / commensals
\r\n- DNA isolation methods
\r\n- DNA electrophoresis, visualization
\r\n\r\n
Preparation and isolation of recombinant protein
\r\n\r\n
- work with bacterial culture, conditions of induction and expression of foreign protein
\r\n- protein isolation in native and denatured form by affinity chromatography
\r\n- analysis of protein sample by electrophoresis
\r\n- electrophoretic methods
\r\n\r\n
In 2020, new methods will be introduced from the insect vector and helminthology fields.
","inLanguage":"en"}]}Technika suchých nátěrů, manipulace s laboratorní myší - krevní roztěr, tlustá kapka - nátěry z kultur prvoků (trichomonády) - barvení suchých nátěrů metodou Giemsy-Romanowského - rychlé barvení Dade Diff-Quik - manipulace s laboratorní myší, pasážování Trypanosoma brucei, Plasmodium berghei - zmražovací techniky, kryoprezervace prvoků Fluorescenční barvící metody - vitální barvení acridinovou oranží - jaderné barvení Hoechstem nebo DAPI - fluorescenční sondy citlivé k pH - značení FITC - imunofluorescence Základní kultivační technika - příprava zásobních roztoků antibiotik - izolace axenické kultury Tritrichomonas foetus pomocí migrační rourky - pasážování axenických kultur, zkouška sterility Klonování - izolace klonů zřeďovací metodou (Tetrahymena pyriformis) - izolace klonů metodou mezního ředění (Trichomonas vaginalis) - izolace klonů bičíkovců z čeledi Trypanosomatidae na agarových plotnách Kvantitativní práce s prvoky - práce s Burkerovou počítací komůrkou - výpočet koncentrace buněk - kvantitativní nasazení růstového pokusu - vyhodnocení růstového pokusu ELISA - využití v diagnostice - test na přítomnost protilátek proti Toxoplasma gondii PCR - využití v diagnostice - test na přítomnost lidských patogenů/komensálů - detekce DNA na gelech - elektroforetické metody Příprava a izolace rekombinantního proteinu - práce s bakteriální kulturou, podmínky indukce a exprese cizorodého proteinu - izolace proteinu v nativní a denaturované formě afinitní chromatografií - analýza proteinového vzorku elektroforézou - elektroforetické metody
Experimentální sání na modelu Trypanosoma culicavium – Culex p. quinquefasciatus
-příprava kultury, počítání v komůrce, ředění kultury-deaktivace krve v teplé lázni, příprava krmítka s membránou-sání-pitva dříve nasátých komárů-fixace a barvení pozitivních preparátů
V roce 2020 bude zavedena další úloha týkající se helmintologie.
Základní laboratorní kurz seznamující s metodami experimentální biologie specificky používanými v parazitologii i v jiných experimentálních oborech. Předmětem praktik je mj. demonstrace a nácvik kultivačních technik, manipulace s laboratorními hlodavci, axenizace a klonování prvoků, příprava nativních a trvalých preparátů pro diagnostiku a cytologii, izolace DNA, ELISA a PCR v diagnostice, příprava a značení preparátů pomocí nepřímé immunofluorescence, izolace rekombinantních proteinů, elektroforetické metody aj. Předmět je vhodný především pro studenty 3. ročníku bakalářského studia, kteří plánují magisterské studium na katedře parazitologie a ještě nemají extenzivní zkušenosti s prací v laboratoři.
Studenti musí mít během praktika laboratorní plášť a předem se musí seznámit s aktuálními proticovidovými opatřeními na stránce https://www.natur.cuni.cz/fakulta/aktuality/archiv-2020/koronavirus-odkazy-na-oficialni-zdroje-informaci-a-zavazne-pokyny
Pozor: V roce 2021 praktikum zahájí ve středu 6. října.