Příprava a charakterizace fosfotriesterázy modifikované pomocí methoxypolyethylenglykolu jako potenciálního bioscavengeru proti otravám organofosfáty
Abstrakt
Bioscavengery jsou považovány za vhodná antidota otrav organofosfáty. Zaměřili jsme se proto na bakteriální fosfotriesterázu (PTE), produkovanou v Escherichia coli.
Hlavní nevýhodou tohoto bakteriálního bioscavengeru je relativně krátký poločas v organizmu a silná imunogenicita po opakovaném podání. Z tohoto důvodu jsme připravili PTE konjugovanou s rozdílnými druhy methoxypolyethylenglykolu (MPEG) jako potenciální katalytické bioscavengery, s cílem vylepšit její biologické vlastnosti.
Enzym byl modifikován dvěma lineárními deriváty MPEG s jednou funkční reaktivní aldehydickou skupinou s molekulovou hmotností 2 kDa a 5 kDa. Optimalizovali jsme reakční podmínky (poměry reagujících látek, teplota a reakční doba) a připravili jsme plně modifikovanou rekombinantní PTE s molekulovou hmotností okolo 52 kDa a 76 kDa.
Modifikovaná PTE byla charakterizována s využitím SDS-PAGE a MALDI-TOF a s pomocí stanovení K-m and V-max.