Detekce DNA odchylek v polymorfním genu pro hydroxymethylbilan syntázu metodou high-resolution melting
Abstrakt
Akutní intermitentní porfyrie (AIP) představuje nejčastější typ akutní porfyrie. Vyvolávající příčinou je defektní gen pro hydrixymethylbilan syntázu.
Diagnóza AIP je zásadní zejména z důvodu prevence život ohrožujících akutních atak jak u symptomatických tak i u asymptomatckých nosičů. Zavedli jsme diagnostickou metodu AIP, high-resolution melting (HRM).
Ze 13 amplikonů amplifikovaných PCR v přítomnosti barviva LCGreen Plus 4 ukázali polymorfní pozadí. Schopnost metody HRM detekovat DNA odchylky v HMBS genu byla testována na 10 známých mutacích zjištěných prostřednictvím LightScanner.
Kromě toho byly testovány vzorky genomické DNA (gDNA) 97 jedinců se suspektní hepatální porfyrií. Byly detekovány všechny možné genotypy z každé ze čtyř polymorfních amplikonů.
Každá z 10 testovaných mutací měla změněný „melting“ profil v porovnání s „melting“ profilem kontrol.