Identifikace Borrelia a Ehrlichia spp. sekvenční analýzou a LightCycler polymerázovou řetězovou reakcí v reálném čase
Abstrakt
Účel studie: Diferencovat genotypy a podtypy Borrelia burgdorferi sensu lato a Ehrlichia spp. v kulturách, ve vzorcích mozkomíšního moku a krve pacientů a ve zvířecích tkáních. Studie se zaměřuje na jižní a východní Čechy a na Moravu.
Materiál: Vyšetřování zahrnovalo 16 kmenů borrelie izolovaných z krve a mozkomíšního moku pacientů a dalších 49 vzorků mozkomíšního moku a krve pacientů s boreliózou, tkání z 80 kusů zvěře a krve z 55 krav. Metody: Diferenciace a kvantifikace těchto dvou patogenů byla provedena pomocí PCR LightCycler v reálném čase s primery 16S rRNA, OpA, recA geny a přímou PCR sekvenční analýzou produktů.
Výsledky: Ukázali jsme 11 kmenů Borrelia garinii, OspA typů 5, 6, 4 a 5 kmenů B. afzelii. B. burgdorferi sensu stricto nebyl v kulturách prokázán.
Sekvenční analýza PCR produktů ze 49 vzorků CSF prokázala B. burgdorferi s.s. u 20,4%, B. afzelii u 12,2%, B. garnii podtypů 6, 5, 4 a 3 u 61,3% - z toho 8,2% vzorků obsahovalo kombinace podobné typům OspA. Souběžná infekce Ehrlichia phagocytophila byla zjištěna u 6,1% vzorků.
Podtyp E. phagocytophila Frankonia I a II byl prokázán u 12,5% zvěřiny a u 9% skotu. B. burgdorferi sensu stricto a B. garinii byly identifikovány u 17,5% zvěře.
PCR v reálném čase byla v tekutinách pacientů méně citlivá než v kulturách a zvířecích tkáních. Závěr: Ukázali jsme, že všechny tři genotypy B. burgdorferi sensu lato jsou schopné způsobit neuroboreliózu.
Průběh infekce a její příznaky mohou být ovlivněny různými podtypy OspA.