Průkaz tuberkulózy pomocí molekurně genetických metod: polymerázové řetězové reakce (PCR) a amplified Mycobacterium tuberculosis direct (AMTD) testů
Abstrakt
Úvod: Tuberkulóza je přenosné onemocnění, ve většině případů s chronickým průběhem. Etiologickým činidlem je Mycobacterium tuberculosis.
Jeho demonstrace je založena na mikroskopických výzkumech a kulturách. Mikroskopie není dostatečně citlivá, zatímco kultury jsou zdlouhavé.
Jednou z možností urychlení diagnostiky jsou molekulárně genetické metody. Účel studie: Porovnat demonstraci mykobakterií pomocí molekulárně genetických metod s výsledky kultur. Metody: K prokázání komplexu nukleových kyselin Mycobacterium tuberculosis jsme použili dvě metody - polymerázovou řetězovou reakci (PCR) a přímý test Amplified Mycobacterium tuberculosis (AMTD).
Vyšetřovali jsme 647 vzorků. Z toho bylo 275 vzorků testováno pomocí PCR a 372 vzorků bylo vyšetřeno pomocí sady AMTD.
Zároveň jsme pro každý vzorek zahájili paralelní kulturu. Výsledky: Ve 275 vzorcích z celkového počtu 647, které byly analyzovány pomocí PCR, byla mykobakteriální DNA prokázána u 18 (6,5%).
Z 372 vzorků vyšetřovaných pomocí AMTD byla mykobakteriální RNA prokázána u 27 (7%). Z 18 PRC pozitivních vzorků 6 (13%) nevedlo k pozitivní mykobakteriální kultuře.
Z 27 pozitivních výsledků RNA metodou AMTD 17 nepřinesla pozitivní kultury. Na druhé straně byla u 2 pacientů (0,7%) zjištěna diagnóza tuberkulózy ověřená kulturami bez pozitivní PCR.
Rozpor mezi výsledky AMTD a kulturami byl také zjištěn u 2 vzorků (0,5%). Závěr: Molekulárně genetické metody podstatně urychlují diagnostiku tuberkulózy.
Tyto metody jsou zvláště důležité v případech paucibacilárního materiálu a jedinečných a neopakovatelných vzorků (biopsie tkání, uzliny, mozkomíšní mok). Vzhledem k možnosti falešně pozitivních výsledků je nezbytné paralelní ověření mikroskopií a kulturami.