Nový koncept přípravy referenčních materiálů s heterozygotním genotypem pro molekulárně diagnostické účely
Abstrakt
Za použití technologie genové syntézy jsme připravili referenční materiál s genotypem složeného heterozygota pro analýzu mutací G20210A v genu pro faktor II a G1691A v genu pro faktor V krevního srážení. Připravený klon obsahoval fragmenty DNA odpovídající zdravým (wild-type) i mutovaným sekvencím obou genů.
Mutované fragmenty byly do klonovacího vektoru vloženy v invertované orientaci vůči fragmentům se sekvencí wild-type. Oboustranným sekvenováním a metodou alelické diskriminace založené na real-time PCR byl u připraveného klonu potvrzen genotyp složeného heterozygota pro mutace G20210A a G1691A.
Námi navržený postup vytvoření heterozygotního referenčního materiálu je jednou z možností, jak získat kontrolní vzorky pro vyšetření jakéhokoliv bialelického polymorfního místa s řídce se vyskytujícími minoritními variantami.