Protokoly pro respirometrii s vysokým rozlišením pro testování aktivity elektronového transportního systému v mitochondriích z prasečích mozků
Abstrakt
Cílem naší studie bylo vyvinout protokoly respirometrie s vysokým rozlišením optimalizované pro mitochondrie prasečích mozků. Optimální koncentrace složek kontrolujících oxidační fosforylaci byly stanoveny titrací izolovaných mitochondrií digitoninem, adenosindifosfátem, respiračními substráty (malát, pyruvát, sukcinát, TMPD), inhibitory (rotenon, malonát, antimycin, kyanid, azid, oligomycin).
Byly navrženy protokoly pro titraci substráty, odpřahovačem a inhibitory (SUIT) pro mitochondriální respiraci spojenou s komplexem I, komplexem II, komplexem I+II a komplexem IV. Byla porovnána hrubá mitochondriální frakce a mitochondrie purifikované na sacharózovém gradientu.
Bylo potvrzeno, že mitochondrie prasečích mozků mohou sloužit jako biologický model pro výzkum mitochondriálního dýchání.
