Antigen mixVP1-BKV4, chimérický protein odvozený od kapsidových proteinů myšího polyomaviru a lidského polyomaviru BK subtypu BKV-IV pro testování výskytu typově specifických protilátek
Abstrakt
Antigen mixVP1-BKV4 byl vyvinut pro imunodetekci protilátek specificky namířených proti BKV, subtypu IV, v krevním séru a plazmě. Antigen mixVP1-BKV4 je tvořen rekombinantním chimérickým proteinem odvozeným od kapsidových proteinů VP1 myšího polyomaviru (MPyV) a lidského polyomaviru B, subtypu BKV-IVc2 (kmen A66-H).
Sekvence chimérického VP1 genu byla vytvořena na základě bioinformatické analýzy sekvencí VP1 genů MPyV (GenBank: AAL35610.1) a BKV subtypu IV (GenBank: BAG84476.1). Konkrétně byla v genu VP1 MPyV vyměněna oblast tzv.
BC smyčky, která mapuje aminokyselinové zbytky 55 až 105. Nově vzniklý gen odvozený od MPyV kódoval tu variabilní oblast VP1 proteinu subtypu BKV IV, která je zodpovědná za interakci s neutralizačními (subtypově specifickými) protilátkami.
Gen pro chimérický antigen mixVP1-BKV4 byl použit pro přípravu rekombinantního bakuloviru a následnou produkci antigenu v bakulovirovém expresním systému. Antigen mixVP1-BKV4 byl izolován z hmyzích buněk pomocí ultracentrifugace v třístupňovém gradientu sacharózy.